STERILISASI ALAT-ALAT DAN MEDIA TANAM

Alat-alat yang dipakai ketika penanaman harus dalam keadaan steril. Alat-alat logam, gelas dan media tanam disterilkan dengan autoclave. Berikut tabel standart waktu, tekanan dan suhu untuk sterilisasi dengan menggunakan autoklaf :

No	Obyek sterilisasi	Waktu (menit)	Tekanan yang dipakai			Suhu (oC)
			Mpa	Kg/cm2	psi
1	Botol kosong	20-40	0.105-0.14	1.05-1.4	15-20	121-126
2	Media tanam	20	0.105-0.14	1.05-1.4	15-20	121-126
3	Air steril	60	0.105-0.14	1.05-1.4	15-20	121-126
4	Peralatan tanam	20-40	0.105-0.14	1.05-1.4	15-20	121-126
5	Media kontaminan	60	0.105-0.14	1.05-1.4	15-20	121-126

Autoklaf yang dapat digunakan ada bermacam-macam, mulai dari yang sederhana sampai yang progamable. Autoklaf yang sederhana menggunakan sumber panas dengan menggunakan kompor gas. Pada autoklaf yang sederhana ini, tekanan dan suhu diatur dengan membesarkan atau mengecilkan sumber api. Kelemahan autoklaf ini adalah perlunya penjagaan dan pengaturan panas secara manual selama masa sterilisasi dilakukan. Keuntungan penggunaan autoklaf ini adalah sederhana pengoperasianya, harganya relatif murah, tidak tergantung pada aliran listrik, dan lebih cepat masak dibandingkan dengan autoklaf listrik.

Autoklaf yang progamable menggunakan sumber energi dari listrik. Alatnya dilengkapi dengan timer dan thermostat. Bila pengatur automatik ini berjalan dengan baik, maka autoklaf ini dapat dijalankan sambil mengerjakan pekerjaan lain. Ke-lemahannya adalah bila salah satu pengatur tidak bekerja, maka pekerjaan persiapan media menjadi sia-sia dan kemungkinan menyebabkan kerusakan total pada autoklaf.

Berikut adalah prosedur sterilisasi dengan autoklaf sederhana (gas) :

1. Autoklaf di isi air sampai batas ”sang-sang atau sarangan”.
2. Kemudian botol dimasukkan sampai penuh dan tutup rapat, dengan posisi katup ’release valve’ terbuka dan ’savety valve’ tertutup.
3. Nyalakan kompor gas dengan nyala api besar.
4. Tunggu sampai air mendidih dan keluar tekanan uap dari katup ’release valve’, kemudian tutup katup tersebut.
5. Biarkan tekanan naik sampai pada tekanan 0.14 Mpa.
6. Kecilkan api kompor dan jaga jarum penunjuk tekanan pada angka 0.14 Mpa dan hitung waktunya.
7. Waktu untuk autoklaf media tanam 20 menit, air steril 1 jam, botol kosong dan alat-alat tanam 30 – 45 menit serta botol kontaminan 1 jam.
8. Apabila waktu sterilisasi sudah tercapai, matikan kompor dan biarkan tekanan turun dengan sendirinya ke angka nol.
9. Buka terlebih dahulu katup ’release valve’, kemudian baru buka tutup autoklaf.